一种基于RPA-CRISPR/Cas12b技术的水稻谷枯病菌快速检测方法

本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR/Cas12b技术的水稻谷枯病菌快速检测方法，属于核酸检测技术领域。所述试剂组合包含特异性RPA引物对（SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2）和sgRNA（SEQ ID NO.3）。所述方法将重组酶聚合酶扩增（RPA）与CRISPR/Cas12b技术相结合，通过RPA对靶标核酸进行恒温扩增，再利用Cas12b/sgRNA复合物识别扩增产物并激活其反式切割活性，从而切割荧光报告分子产生信号。本发明通过将优化的反应体系集成于离心式微流控芯片，实现了“样本进，结果出”的全流程闭管自动化检测。该方法可在30分钟内完成，灵敏度高达0.156 pg/反应，特异性强，适用于田间、口岸等现场的快速检测。